Team:NCTU Formosa/Notebook/test6

From 2014.igem.org

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<div class="calendar-note">
<div class="single note">
<div class="single note">
-
<p>7/1
 
-
Ligation of [J23101+B0032+PSB1C3] Cr (G1)
 
-
Digestion of [B0032] Ar
 
-
Electrophoresis of plasmid and digestion products of[B0032+BFP+J61048]Cr (XP)  (G2)
 
-
</p>
 
-
<p>7/2
 
-
Transformation of ligation product [B0032+K592100+J61048] Ar and [J23101+B0032] Cr (G1)
 
-
Cultivation of [B0032+BFP+J61048] Cr in LB broth (G2)
 
-
</p><br></div>
 
-
<div  class="single note">
 
-
<p>7/3
 
-
Mini-prep of [B0032+BFP+J61048] and then digestion: (XP)
 
-
Electrophoresis of plasmid and digestion products of[B0032+BFP+J61048]Cr (XP) (G2)
 
-
</p>
 
<p>
<p>
-
7/4  
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/4</span></font><br></p>
-
Digestion of [T7 promoter](SP) (G2)
+
-
Cultivation of [J23101] Ar (G3)
+
-
</p>
+
<p>
<p>
-
7/5
+
<font color="yellow">Cultivation of</font></p>
-
PCR:[B0032+K592100+J61048*11] Ar (G1)
+
<p>
-
Electrophoresis of PCR products (G1)
+
P<sub>cons</sub>+RBS+AseI PCR product-1,2,3,4,7,8 Ar</p>
-
Ligation of [J23101+B0032+PSB1C3*3] Cr (G1)
+
<p>
-
Electrophoresis of plasmid and digestion products:[T7promoter](SP),[B0031+BFP+J61048](XP)  
+
XhoI+PSB1K3 PCR product-1,2 Kr</p>
-
Ligation:[T7 promoter])(SP)+[B0032+BFP+J61048](XP) (G2)
+
<p>
-
</p><p>7/6
+
PSB1A3 Ar</p>
-
Transform the ligation products made at 7/5 (G2)
+
<p>
-
</p><p>
+
<font color="yellow">Cultivation plate test</font></p>
-
7/7
+
<p>
-
Transformation of [J23101+B0032*5] Cr (G1)
+
Ar  plate and  Kr plate</p>
-
Cultivation of [B0032+K592100+J61048*2] Ar (G1)
+
<p>
-
Cultivation of [J23101] Ar (G3)
+
<font color="yellow">Digestion of</font></p>
-
Digestion of [B0015] Ar (XP), [J61048] Ar (XP) (G3)
+
<p>
-
</p><p>
+
[PBAN-HindIII] Kr*2 (EP)</p><p>
-
7/8  
+
[PBAN-NheI]Kr*2 (EP)</p><p>
-
Mini-prep of [B0032+K592100+J61048*2] Ar and then digest only one of two: (XP) (G1)
+
[PBAN-KpnI-HF]Kr*2 (EP)</p>
-
PCR:[T7+B0032+BFP+J61048] (G2)
+
<p>
-
Digestion of [J23101] Ar (ES) (G3)
+
[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(ES)</p><p>
-
</p><p>
+
[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(ES)</p>
-
7/9  
+
<p>
-
Cultivation of [B0032+BFP+J61048]Cr and [T7+B0032+BFP+J61048]Kr(G2)
+
<font color="yellow">PCR of</font></p>
-
</p><p>
+
<p>
 +
[J23101+B0034+KpnI-HF] Ar*3</p>
 +
<p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p>
 +
<p>
 +
[J23101+B0034+KpnI-HF+PSB1C3]</p>
 +
<p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p>
 +
<p>
 +
[PBAN-HindIII] Kr*2 (EP)</p><p>
 +
[PBAN-NheI]Kr*2 (EP)</p><p>
 +
[PBAN-KpnI-HF]Kr*2 (EP)</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(ES)</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(ES)</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(EP)*2</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(EP)</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (KpnI-HF)]Ar(EP)*2</p><p>
 +
[23101+B0034+PBAN (KpnI-HF)]Ar PCR*3</p>
 +
<p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/5</span></font><br></p>
 +
<p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                Well 1 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--1 (EP) Ar</p><p>
 +
                Well 2 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--2 (EP) Ar</p><p>
 +
                Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--3 (EP) Ar</p><p>
 +
                Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--4 (EP) Ar</p><p>
 +
                Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--7 (EP) Ar （DNA sequencing）</p><p>
 +
                Well 6 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI--8 (EP) Ar</p><p>
 +
                Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI--2 (EP) Cr （DNA sequencing）</p><p>
 +
                Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS+Ndel--2 (EP) Cr （DNA sequencing）</p><p>
 +
                Well 9 1 Kb marker</p><p>
 +
                Well 10 P<sub>cons</sub>+RBS+Ndel--13 (EP) Cr</p><p>
 +
                Well 11 SacI--3 (XP) Kr</p><p>
 +
                Well 12 SacI--4.1 (XP) Kr</p><p>
 +
                Well 13 SacI--4.2 (XP) Kr</p><p>
 +
                Well 14 XhoI--7 (EP) Kr （DNA sequencing）</p><p>
 +
                Well 15 XhoI--8 (EP) Kr（DNA sequencing）</p><p>
 +
                Well 16 SalI--3 (XP) Kr</p><p>
 +
<font color="yellow">Mini-prep of</font> </p><p> 
 +
                P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-7</p><p>
 +
                P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-8</p><p>
 +
                P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-9</p><p> 
 +
<font color="yellow">Digestion of</font> </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-7 (EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-8 (EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF-9 (EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font> </p><p>
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF Ar PCR product-7,8,9 Ar</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font> </p><p>
 +
[J23101+B0034+HindIII+B0034+PSB1K3] Kr</p><p>
 +
[J23101+B0034+HindIII+J61048+PSB1K3] Kr</p><p>
 +
[J23101+B0034+NheI+B0034+PSB1K3] Kr</p><p>
 +
[J23101+B0034+NheI+J61048+PSB1K3] Kr</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font> digested product of</p><p>
 +
[P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF]Ar (EP)*3 </p><p>
 +
</p>
 +
 
<br></div>
<br></div>
<div class="single note">
<div class="single note">
<p>
<p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/9</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>     
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+SacI PCR product-16 Ar</p><p>
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+SaII  PCR product-17 Ar</p><p>
 +
RBS+BFP+Ter  PCR product-16,17,29,30 Ar</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
XhoI+PSB1K3 (EP)</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/10</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Mini-prep of</font></p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-16 Ar</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-17 Ar</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-29 Ar</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-30 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Sac-16 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Sal-17 Ar</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-16 Ar(EP)</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-17 Ar(EP)</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-29 Ar(EP)</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-30 Ar(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-16 Ar(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-17 Ar(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-16 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-17 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 RBS+BFP+Ter-16 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 RBS+BFP+Ter-17 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 6 RBS+BFP+Ter-29 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 7 RBS+BFP+Ter-30 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 8 XhoI-7 dig(XP) Kr</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/11</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN(ES)(8 kind except of XhoI)</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter(XP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-7 Ar</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI-7 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-16 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-17 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-2 Ar</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-2 Ar</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-2 Ar</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-2 Ar</p><p>
 +
                  SalI-3 Kr</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-7 Ar</p><p>
-
 
+
<font color="yellow">DNA sequencing of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SaeI Ar 8ul VF2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI Ar  8ul VF2</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-29 Ar 8ul VF2 + 8ul VR</p><p>
 +
                  RBS+BFP+Ter-30 Ar 5ul VF2 + 5ul VR</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI dig(EP)-->9/11 mini</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font> </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+BFP+Ter-30 Kr</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/12</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+BFP+Ter Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI Ar</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI dig(EP) Cr</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI dig(EP) Cr</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI dig(EP) Ar</p><p>
 +
                  Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI dig(EP) Ar</p><p>
 +
                  Well 6 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI dig(EP) Ar</p><p>
 +
                  Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII dig(EP) Ar</p><p>
 +
                  Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS+NheI dig(EP) Ar</p><p>
 +
                  Well 9 P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI dig(EP) Ar</p>
 +
<p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/13</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI Kr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI Kr</p><p>
 +
<font color="yellow">PCR of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Xhol Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr x16</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr x16</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Gel 1</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr x16</p><p>
 +
                  Gel 2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr x16</p><p>
 +
                  Gel 3</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  Gel 4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  Gel 5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr x8</p><p>
 +
                  Gel 6</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Xhol Kr x8</p><p>
 +
                  psb1K3 dig(EP)</p>
<br></div>
<br></div>
<div class="single note">
<div class="single note">
 +
<p><font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/16</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
 +
                  psb3K3 *2</p><p>
 +
                  psb3C3</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  psb3K3 dig(EP)</p><p>
 +
                  psb1C3 dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter x8</p>
<p>
<p>
-
5/19
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/17</span></font><br></p><p>
-
Cultivation of [J23101]Ar,[B0015]Ar,[J61048]Ar (G1)
+
<font color="yellow">Mini-prep of</font></p><p>
-
</p><p>
+
                  PBAN：XhoI</p><p>
-
5/20
+
                              SalI</p><p>
-
Transform of  [T7polymerase] Kr and [PSB1K3] Kr (G2)
+
                              SacI</p><p>
-
Electrophoresis of plasmid and digested product of [T7polymerase*6] Kr and [PSB1K3*4]Kr (G2)
+
                              KpnI</p><p>
-
Mini-prep of [J23101]Ar, [B0015]Ar, [J61048]Ar (G1)
+
                              Ndel</p><p>
-
Digestion of [J23101]Ar (ES), [B0015]Ar (XP), [J61048]Ar (XP) (G1)
+
                              AseI</p><p>
-
</p>
+
                              NcoI</p><p>
 +
                              NheI</p><p>
 +
                              HindIII (fail)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter：AseI-4</p><p>
 +
                                                                              Ndel-8</p><p>
 +
                                                                              HindIII-4 (fail)</p><p>
 +
                                                                              SacI-9(fail)</p><p>
 +
                                                                              KpnI-1</p><p>
 +
                                                                              NcoI-2</p><p>
 +
                                                                              NheI-1</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  PBAN：XhoI</p><p>
 +
                              SalI</p><p>
 +
                              SacI</p><p>
 +
                              KpnI</p><p>
 +
                              Ndel</p><p>
 +
                              AseI</p><p>
 +
                              NcoI</p><p>
 +
                              AseI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter：AseI-4</p><p>
 +
                                                                              Ndel-8</p><p>
 +
                                                                              KpnI-1</p><p>
 +
                                                                              NcoI-2</p><p>
 +
                                                                              NheI-1</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (Ndel)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (NcoI)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SacI)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (HindIII)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SalI)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (NheI)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (KpnI)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (AseI)</p><p>
 +
                  PBAN AseI</p><p>
 +
                  PBAN Ndel</p><p>
 +
                  PBAN KpnI</p><p>
 +
                  PBAN SacI</p><p>
 +
                  PBAN SalI</p><p>
 +
                  PBAN XhoI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-1 dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Xhol-1 dig(ES)</p><p>
 +
                  psb1C3 dig(ES)</p><p>           
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SacI)-4.12</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (HindIII)-6</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SalI)-9</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  B0034 Kr dig(ES)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  NcoI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Ndel  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  SalI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/18</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 B0034  Kr dig(ES)</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 NcoI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 6 Ndel  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 7 SalI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 B0034  Kr dig(ES)</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 NcoI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 6 Ndel  Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 7 SalI  Kr dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Mini-prep of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter-6</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter-9</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter-11</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  NheI Cr</p><p>
 +
                  NcoI Cr</p>
<p>
<p>
-
5/21
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/20</span></font><br></p><p>
-
Digestion of [T7polymerase*6] Kr and [PSB1K3*2] Kr (G2)
+
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
-
Mini-prep of [T7polymerase] Kr and [PSB1K3] Kr (G2)
+
                  AseI mini Cr</p><p>
-
Electrophoresis of digested product and plasmid [J23101]Ar(ES), [B0015]Ar(XP), [J61048]Ar(XP) and digested product [PSB1K3]Kr(EP) (G1)
+
 
-
Ligation of [K592100+J61048+PSB1K3] Kr (G1)
+
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
-
</p>
+
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 HindIII-2 Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 3 SacI Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-6+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-11+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 6 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-9+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 7 RBS+BFP+Ter Ar dig(XP)</p><p>
 +
                  Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)</p>
 +
 
 +
<br></div>
 +
<div class="single note">
<p>
<p>
-
5/22
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/21</span></font><br></p><p>
-
Electrophoresis of plasmid and digested product of [T7polymerase] Kr (ES) and [PSB1K3]Kr (EP) (G2)
+
<font color="yellow">Electrophoresis of</font> PCR products of</p><p>
-
</p>
+
                Gel 1</p><p>
-
<p>
+
                  Well 1 Marker</p><p>
-
5/23
+
                  Well 2 3H1</p><p>
-
Transform of ligation product [K592100+J61048+PSB1K3]Kr (G1)
+
                  Well 3 3H2</p><p>
-
</p>
+
                  Well 4 3H3</p><p>
-
<p>
+
                  Well 5 3H4</p><p>
-
5/24
+
                  Well 6 3H5</p><p>
-
Digestion of [J61048] Ar (XP) (G2)
+
                  Well 7 3H6</p><p>
-
PCR: [BFP+B0032*4] Kr and [T7 promoter*1] Ar Kr (G2)
+
                  Well 8 Marker</p><p>
-
Electrophoresis of PCR products [BFP+B0032*4] Kr and [T7 promoter*1] Ar Kr, [J61048] Ar  (G2)
+
                  Well 9 6K1</p><p>
-
</p>
+
                  Well 10 6K2</p><p>
 +
                  Well 11 6K3</p><p>
 +
                  Well 12 6K4</p><p>
 +
                  Well 13 6K5</p><p>
 +
                  Well 14 6K6</p><p>
 +
                  Well 15 3Sl1</p><p>
 +
                  Well 16 3Sl2</p><p>
 +
                  Well 17 3Sl3</p><p>
 +
        Gel 2</p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 6Sl4</p><p>
 +
                  Well 3 6Sl5</p><p>
 +
                  Well 4 3Nh1</p><p>
 +
                  Well 5 3Nh2</p><p>
 +
                  Well 6 3Nh3</p><p>
 +
                  Well 7 3Nh4</p><p>
 +
                  Well 8 Marker</p><p>
 +
                  Well 9 3Nh5</p><p>
 +
                  Well 10 3Nh6</p><p>
 +
                  Well 11 6X1</p><p>
 +
                  Well 12 6X2</p><p>
 +
                  Well 13 6X3</p><p>
 +
                  Well 14 6X4</p><p>
 +
                  Well 15 6X5</p><p>
 +
                  Well 16 6X6</p><p>
 +
                  Well 17 1K1</p><p>
 +
Gel 3</p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 1K2</p><p>
 +
                  Well 3 1K3</p><p>
 +
                  Well 4 1K4</p><p>
 +
                  Well 5 1K5</p><p>
 +
                  Well 6 1K6</p><p>
 +
                  Well 7 1X1</p><p>
 +
                  Well 8 Marker</p><p>
 +
                  Well 9 1X2</p><p>
 +
                  Well 10 1X3</p><p>
 +
                  Well 11 1X4</p><p>
 +
                  Well 12 1X5</p><p>
 +
                  Well 13 1X6</p><p>
 +
                  Well 14 3K1</p><p>
 +
                  Well 15 3K2</p><p>
 +
                  Well 16 3K3</p><p>
 +
                  Well 17 3K4</p><p>
 +
Gel 4</p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 3K5</p><p>
 +
                  Well 3 3K6</p><p>
 +
                  Well 4 3Sc1</p><p>
 +
                  Well 5 3Sc2</p><p>
 +
                  Well 6 3Sc3</p><p>
 +
                  Well 7 3Sc4</p><p>
 +
                  Well 8 Marker</p><p>
 +
                  Well 9 3Sc5</p><p>
 +
                  Well 10 3Sc6</p><p>
 +
                  Well 11 1Sc1</p><p>
 +
                  Well 12 1Sc2</p><p>
 +
                  Well 13 1Sc3</p><p>
 +
                  Well 14 1Sc4</p><p>
 +
                  Well 15 1Sc5</p><p>
 +
                  Well 16 1Sc6</p><p>
 +
                  Well 17 1Nc1</p><p>
 +
 
 +
 
 +
Gel 5</p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 1Nc2</p><p>
 +
                  Well 3 1Nc3</p><p>
 +
                  Well 4 1Nc4</p><p>
 +
                  Well 5 1Nc5</p><p>
 +
                  Well 6 1Nc6</p><p>
 +
                  Well 7 1A1</p><p>
 +
                  Well 8 Marker</p><p>
 +
                  Well 9 1A2</p><p>
 +
                  Well 10 1A3</p><p>
 +
                  Well 11 1A4</p><p>
 +
                  Well 12 1A5</p><p>
 +
                  Well 13 1A6</p><p>
 +
                  Well 14 1Nd1</p><p>
 +
                  Well 15 1Nd2</p><p>
 +
                  Well 16 1Nd3</p><p>
 +
                  Well 17 1Nd4</p><p>
 +
Gel 6</p><p>
 +
Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 1Nd5</p><p>
 +
                  Well 3 1Nd6</p><p>
 +
                  Well 4 3X1</p><p>
 +
                  Well 5 3X2</p><p>
 +
                  Well 6 3X3</p><p>
 +
                  Well 7 3X4</p><p>
 +
                  Well 8 Marker</p><p>
 +
                  Well 9 3X5</p><p>
 +
                  Well 10 3X6</p><p>
 +
                  Well 11 3A1</p><p>
 +
                  Well 12 3A2</p><p>
 +
                  Well 13 3A3</p><p>
 +
                  Well 14 3A4</p><p>
 +
                  Well 15 3A5</p><p>
 +
                  Well 16 3A6</p><p>
 +
 
 +
 
 +
 
 +
 
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  KpnI-1</p><p>
 +
                  NdeI-1</p><p>
 +
                  XhoI-1</p><p>
 +
                  SacI-1</p><p>
 +
                  AseI-1</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-1</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI-5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-1</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-1</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-1+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-6+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  SalI Kr dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  NdeI dig(EP)+C backbone</p><p>
 +
 
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/22</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
 +
                  NheI Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+Ndel+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  HindIII(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  SacI-3 Kr</p><p>
 +
                  NcoI-7 Cr</p><p>
 +
                  NcoI-8 Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-5+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  pbs3C5</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/23</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 KpnI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 3 NdeI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 XhoI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 SacI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 6 AseI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS +KpnI-4  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 9 P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 10 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI-5 dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 11 P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 12 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 13 P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-7+RBS+BFP+Ter  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 14 SalI Kr dig(EP) 9/21</p><p>
 +
                  Well 15 SalI Kr dig(EP) 9/19</p><p>
 +
 
 +
<font color="yellow">DNA sequencing of</font></p><p>
 +
                  KpnI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  NdeI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  XhoI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  SacI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  AseI-1  Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-4  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4  dig(EP)(fail)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI-5  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-1  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI-7+RBS+BFP+Ter  dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/24</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  NheI Cr </p><p>
 +
                  psb3C5 Cr </p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr </p><p>
 +
                  NheI Cr </p><p>
 +
                  psb3C5 Cr </p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 SalI Kr dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  Well 5 NcoI Cr  dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Digestion of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2 Cr dig(EP)</p><p>
 +
                  NcoI-8 Cr  dig(EP)</p><p>
 +
                  SalI-3 Kr dig(EP)</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  HindIII+psb1C3</p><p>
 +
<font color="yellow">PCR of</font></p><p>
 +
                  SacI x8</p><p>
 +
                  SalI x5</p><p>
 +
                  HindIII x2</p><p>
 +
                  NheI x8</p><p>
 +
<font color="yellow">Mini-prep and digestion of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter </p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  psb3C5 </p><p>
 +
                  NheI</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/25</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis and DNA sequencing of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 NheI (fail)</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter (fail)</p><p>
 +
 
 +
<font color="yellow">Transformation of</font></p><p>
 +
                  HindIII</p><p>
 +
                  SalI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
 
 +
<font color="yellow">PCR of</font></p><p>
 +
                  NcoI x5(9.10.11.12.13)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI x5(7.8.9.10.11)</p><p>
 +
 
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  NheI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2(9/22)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-8(9/22)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter x2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter x2</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/26</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Mini-prep and digestion(EP) of</font></p><p>
 +
                  NcoI</p><p>
 +
                  NheI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-1+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-2+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-1+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-2+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 4 NcoI</p><p>
 +
                  Well 5 NheI</p><p>
 +
                  Well 6 P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4</p><p>
 +
                  Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  psb3C5 x2</p><p>
 +
                  HindIII-3</p><p>
 +
                  HindIII-4</p><p>
 +
                  SalI-3</p><p>
 +
                  SalI-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII-4+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-4+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-4+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-4+RBS+BFP+Ter</p>
<br></div>
<br></div>
<div class="single note">
<div class="single note">
<p>
<p>
-
5/27
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/28</span></font><br></p><p>
-
Electrophoresis of digested product of [mGFP] Ar (ES), [J61048] Ar (XP) ,[B0015] Ar (XP) (G3)
+
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
-
Digestion of [J61048] Ar (XP) and [T7polymerase] Kr (ES) (G2)
+
                  Well 1 HindIII-3</p><p>
-
Cultivation of [PSB1K3*3] Kr(G2)
+
                  Well 2 HindIII-4</p><p>
-
</p>
+
                  Well 3 SalI-3</p><p>
-
<p>
+
                  Well 4 SalI-4</p><p>
-
5/28
+
                  Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
PCR:[PSBIK3*5]Kr , [PSBIA3*5]Ar , [PSBIC3*5]Cr ,[J61048*5]Ar ,[B0015*5]Ar and [BFP*5](G1)
+
                  Well 6 Marker</p><p>
-
Mini-prep of [PSB1K3*3] Kr(G2)
+
                  Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
Digestion of  [PSB1K3*3] Kr (EP) (G2)
+
                  Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI-4+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
Electrophoresis of plasmid and digested [PSB1K3] Kr (EP), [T7polymerase] Kr (ES), [J61048] Ar (XP) (G2)
+
                  Well 9 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
</p>
+
                  Well 10 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-4+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
<p>
+
                  Well 11 psb3C5</p><p>
 +
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/29</span></font><br></p><p>
 +
<font color="yellow">Electrophoresis of</font></p><p>
 +
                  Well 1 Marker</p><p>
 +
                  Well 2 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 3 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 4 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 5 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 6 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 7 P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 8 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 9 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 10 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 11 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 12 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 13 P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 14 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 15 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 16 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 17 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 18 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 19 P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  Well 20 psb3C5 dig</p><p>
 +
                  Well 21 Marker</p><p>
 +
<font color="yellow">Ligation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+KpnI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+AseI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI  +  pbs3C5</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter  +  pbs1C3</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter  +  pbs1C3</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI  +  pbs1C3</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NcoI  +  pbs1C3</p><p>
 +
<font color="yellow">DNA sequencing of</font></p><p>
 +
                  SalI-4</p><p>
 +
                  HindIII-4</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI-2</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-4</p><p>
 +
                  NheI(9/26)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter(9/30)</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter(9/30)</p>
-
5/29
 
-
Digestion of [mGFP] Ar (ES), [J61048] Ar (XP) ,[B0015] Ar (XP) (G3)
 
-
Transform of [J23101] Ar (G1)
 
-
Transform of [T7 promoter] Ar Kr (G2)
 
-
Electrophoresis of plasmid and digested product of [J61048] Ar (ES), [T7polymerase] Kr (ES) (G2)
 
-
Ligation of  [J61048+J61048] Cr, [T7polymerase+J61048] Kr, [RBS+BFP] Kr (G2)
 
-
Ligation of  [Plac+B0032+PSB1K3]  Kr (G3)
 
-
</p>
 
<p>
<p>
-
5/30
+
<font color="#FF0000"><span style="font-size:1cm;">9/30</span></font><br></p><p>
-
Transform of ligation product (G2)
+
<font color="yellow">PCR and Electrophoresis of</font></p><p>
-
Transform of ligation product [Plac+B0032+PSB1K3]  Kr (G3)
+
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter</p><p>
-
</p>
+
                  NcoI</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
<font color="yellow">Cultivation of</font></p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-11+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NheI-13+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+NdeI-10+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-3+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+XhoI-5+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-2+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  P<sub>cons</sub>+RBS+SacI-11+RBS+BFP+Ter</p><p>
 +
                  NcoI-3</p><p>
 +
                  NcoI-12</p>
<br></div>
<br></div>
 +
</div>
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</div>
</div>

Latest revision as of 15:22, 17 October 2014

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9/4

Cultivation of

Pcons+RBS+AseI PCR product-1,2,3,4,7,8 Ar

XhoI+PSB1K3 PCR product-1,2 Kr

PSB1A3 Ar

Cultivation plate test

Ar plate and Kr plate

Digestion of

[PBAN-HindIII] Kr*2 (EP)

[PBAN-NheI]Kr*2 (EP)

[PBAN-KpnI-HF]Kr*2 (EP)

[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(ES)

[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(ES)

PCR of

[J23101+B0034+KpnI-HF] Ar*3

Ligation of

[J23101+B0034+KpnI-HF+PSB1C3]

Electrophoresis of

[PBAN-HindIII] Kr*2 (EP)

[PBAN-NheI]Kr*2 (EP)

[PBAN-KpnI-HF]Kr*2 (EP)

[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(ES)

[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(ES)

[23101+B0034+PBAN (HindIII)]Ar(EP)*2

[23101+B0034+PBAN (NheI)]Ar(EP)

[23101+B0034+PBAN (KpnI-HF)]Ar(EP)*2

[23101+B0034+PBAN (KpnI-HF)]Ar PCR*3

9/5

Electrophoresis of

Well 1 Pcons+RBS+AseI--1 (EP) Ar

Well 2 Pcons+RBS+AseI--2 (EP) Ar

Well 3 Pcons+RBS+AseI--3 (EP) Ar

Well 4 Pcons+RBS+AseI--4 (EP) Ar

Well 5 Pcons+RBS+AseI--7 (EP) Ar （DNA sequencing）

Well 6 Pcons+RBS+AseI--8 (EP) Ar

Well 7 Pcons+RBS+NcoI--2 (EP) Cr （DNA sequencing）

Well 8 Pcons+RBS+Ndel--2 (EP) Cr （DNA sequencing）

Well 9 1 Kb marker

Well 10 Pcons+RBS+Ndel--13 (EP) Cr

Well 11 SacI--3 (XP) Kr

Well 12 SacI--4.1 (XP) Kr

Well 13 SacI--4.2 (XP) Kr

Well 14 XhoI--7 (EP) Kr （DNA sequencing）

Well 15 XhoI--8 (EP) Kr（DNA sequencing）

Well 16 SalI--3 (XP) Kr

Mini-prep of

Pcons+RBS+KpnI-HF-7

Pcons+RBS+KpnI-HF-8

Pcons+RBS+KpnI-HF-9

Digestion of

Pcons+RBS+KpnI-HF-7 (EP)

Pcons+RBS+KpnI-HF-8 (EP)

Pcons+RBS+KpnI-HF-9 (EP)

Cultivation of

Pcons+RBS+KpnI-HF Ar PCR product-7,8,9 Ar

Ligation of

[J23101+B0034+HindIII+B0034+PSB1K3] Kr

[J23101+B0034+HindIII+J61048+PSB1K3] Kr

[J23101+B0034+NheI+B0034+PSB1K3] Kr

[J23101+B0034+NheI+J61048+PSB1K3] Kr

Electrophoresis of digested product of

[Pcons+RBS+KpnI-HF]Ar (EP)*3


9/9

Cultivation of

Pcons+RBS+SacI PCR product-16 Ar

Pcons+RBS+SaII PCR product-17 Ar

RBS+BFP+Ter PCR product-16,17,29,30 Ar

Digestion of

XhoI+PSB1K3 (EP)

9/10

Mini-prep of

RBS+BFP+Ter-16 Ar

RBS+BFP+Ter-17 Ar

RBS+BFP+Ter-29 Ar

RBS+BFP+Ter-30 Ar

Pcons+RBS+Sac-16 Ar

Pcons+RBS+Sal-17 Ar

Digestion of

RBS+BFP+Ter-16 Ar(EP)

RBS+BFP+Ter-17 Ar(EP)

RBS+BFP+Ter-29 Ar(EP)

RBS+BFP+Ter-30 Ar(EP)

Pcons+RBS+SacI-16 Ar(EP)

Pcons+RBS+SalI-17 Ar(EP)

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 Pcons+RBS+SacI-16 dig(EP)

Well 3 Pcons+RBS+SalI-17 dig(EP)

Well 4 RBS+BFP+Ter-16 dig(EP)

Well 5 RBS+BFP+Ter-17 dig(EP)

Well 6 RBS+BFP+Ter-29 dig(EP)

Well 7 RBS+BFP+Ter-30 dig(EP)

Well 8 XhoI-7 dig(XP) Kr

9/11

Digestion of

Pcons+RBS+PBAN(ES)(8 kind except of XhoI)

RBS+BFP+Ter(XP)

Ligation of

Pcons+RBS+XhoI-7 Ar

Cultivation of

Pcons+RBS+AseI-7 Ar

Pcons+RBS+SacI-16 Ar

Pcons+RBS+SalI-17 Ar

Pcons+RBS+NcoI-2 Ar

Pcons+RBS+NdeI-2 Ar

RBS+BFP+Ter-2 Ar

RBS+BFP+Ter-2 Ar

SalI-3 Kr

Ligation of

Pcons+RBS+XhoI-7 Ar

DNA sequencing of

Pcons+RBS+SaeI Ar 8ul VF2

Pcons+RBS+SalI Ar 8ul VF2

RBS+BFP+Ter-29 Ar 8ul VF2 + 8ul VR

RBS+BFP+Ter-30 Ar 5ul VF2 + 5ul VR

Digestion of

Pcons+RBS+HindIII dig(EP)

Pcons+RBS+NheI dig(EP)

Pcons+RBS+NcoI dig(EP)-->9/11 mini

Pcons+RBS+NdeI dig(EP)

Pcons+RBS+SacI dig(EP)

Pcons+RBS+SalI dig(EP)

Pcons+RBS+AseI dig(EP)

Pcons+RBS+KpnI dig(EP)

Ligation of

Pcons+RBS+BFP+Ter-30 Kr

9/12

Transformation of

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+BFP+Ter Kr

Pcons+RBS+XhoI Ar

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 Pcons+RBS+NdeI dig(EP) Cr

Well 3 Pcons+RBS+NcoI dig(EP) Cr

Well 4 Pcons+RBS+SacI dig(EP) Ar

Well 5 Pcons+RBS+SalI dig(EP) Ar

Well 6 Pcons+RBS+AseI dig(EP) Ar

Well 7 Pcons+RBS+HindIII dig(EP) Ar

Well 8 Pcons+RBS+NheI dig(EP) Ar

Well 9 Pcons+RBS+KpnI dig(EP) Ar

9/13

Ligation of

Pcons+RBS+AseI Kr

Pcons+RBS+NdeI Kr

Pcons+RBS+SalI Kr

Pcons+RBS+SacI Kr

PCR of

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+Xhol Kr x8

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr x16

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr x16

Electrophoresis of

Gel 1

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Kr x16

Gel 2

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Kr x16

Gel 3

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Gel 4

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Gel 5

Pcons+RBS+KpnI-HF+RBS+BFP+Ter Kr x8

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr x8

Gel 6

Pcons+RBS+Xhol Kr x8

psb1K3 dig(EP)


9/16

Transformation of

psb3K3 *2

psb3C3

Digestion of

psb3K3 dig(EP)

psb1C3 dig(EP)

Cultivation of

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter x8

9/17

Mini-prep of

PBAN：XhoI

SalI

SacI

KpnI

Ndel

AseI

NcoI

NheI

HindIII (fail)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter：AseI-4

Ndel-8

HindIII-4 (fail)

SacI-9(fail)

KpnI-1

NcoI-2

NheI-1

Digestion of

PBAN：XhoI

SalI

SacI

KpnI

Ndel

AseI

NcoI

AseI

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter：AseI-4

Ndel-8

KpnI-1

NcoI-2

NheI-1

Electrophoresis of

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (Ndel)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (NcoI)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SacI)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (HindIII)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SalI)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (NheI)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (KpnI)

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (AseI)

PBAN AseI

PBAN Ndel

PBAN KpnI

PBAN SacI

PBAN SalI

PBAN XhoI

Pcons+RBS+XhoI-1 dig(EP)

Pcons+RBS+Xhol-1 dig(ES)

psb1C3 dig(ES)

Cultivation of

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SacI)-4.12

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (HindIII)-6

Pcons+RBS+PBAN+RBS+BFP+Ter (SalI)-9

Digestion of

B0034 Kr dig(ES)

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

NcoI Kr dig(EP)

Ndel Kr dig(EP)

SalI Kr dig(EP)

9/18

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 B0034 Kr dig(ES)

Well 3 Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 4 Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 5 NcoI Kr dig(EP)

Well 6 Ndel Kr dig(EP)

Well 7 SalI Kr dig(EP)

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 B0034 Kr dig(ES)

Well 3 Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 4 Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 5 NcoI Kr dig(EP)

Well 6 Ndel Kr dig(EP)

Well 7 SalI Kr dig(EP)

Mini-prep of

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter-6

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter-9

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter-4

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter-11

Ligation of

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr

NheI Cr

NcoI Cr

9/20

Transformation of

AseI mini Cr

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 HindIII-2 Kr dig(EP)

Well 3 SacI Kr dig(EP)

Well 4 Pcons+RBS+HindIII-6+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 5 Pcons+RBS+SacI-11+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 6 Pcons+RBS+SacI-9+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)

Well 7 RBS+BFP+Ter Ar dig(XP)

Well 8 Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Kr dig(EP)


9/21

Electrophoresis of PCR products of

Gel 1

Well 1 Marker

Well 2 3H1

Well 3 3H2

Well 4 3H3

Well 5 3H4

Well 6 3H5

Well 7 3H6

Well 8 Marker

Well 9 6K1

Well 10 6K2

Well 11 6K3

Well 12 6K4

Well 13 6K5

Well 14 6K6

Well 15 3Sl1

Well 16 3Sl2

Well 17 3Sl3

Gel 2

Well 1 Marker

Well 2 6Sl4

Well 3 6Sl5

Well 4 3Nh1

Well 5 3Nh2

Well 6 3Nh3

Well 7 3Nh4

Well 8 Marker

Well 9 3Nh5

Well 10 3Nh6

Well 11 6X1

Well 12 6X2

Well 13 6X3

Well 14 6X4

Well 15 6X5

Well 16 6X6

Well 17 1K1

Gel 3

Well 1 Marker

Well 2 1K2

Well 3 1K3

Well 4 1K4

Well 5 1K5

Well 6 1K6

Well 7 1X1

Well 8 Marker

Well 9 1X2

Well 10 1X3

Well 11 1X4

Well 12 1X5

Well 13 1X6

Well 14 3K1

Well 15 3K2

Well 16 3K3

Well 17 3K4

Gel 4

Well 1 Marker

Well 2 3K5

Well 3 3K6

Well 4 3Sc1

Well 5 3Sc2

Well 6 3Sc3

Well 7 3Sc4

Well 8 Marker

Well 9 3Sc5

Well 10 3Sc6

Well 11 1Sc1

Well 12 1Sc2

Well 13 1Sc3

Well 14 1Sc4

Well 15 1Sc5

Well 16 1Sc6

Well 17 1Nc1

Gel 5

Well 1 Marker

Well 2 1Nc2

Well 3 1Nc3

Well 4 1Nc4

Well 5 1Nc5

Well 6 1Nc6

Well 7 1A1

Well 8 Marker

Well 9 1A2

Well 10 1A3

Well 11 1A4

Well 12 1A5

Well 13 1A6

Well 14 1Nd1

Well 15 1Nd2

Well 16 1Nd3

Well 17 1Nd4

Gel 6

Well 1 Marker

Well 2 1Nd5

Well 3 1Nd6

Well 4 3X1

Well 5 3X2

Well 6 3X3

Well 7 3X4

Well 8 Marker

Well 9 3X5

Well 10 3X6

Well 11 3A1

Well 12 3A2

Well 13 3A3

Well 14 3A4

Well 15 3A5

Well 16 3A6

Cultivation of

KpnI-1

NdeI-1

XhoI-1

SacI-1

AseI-1

Pcons+RBS+HindIII-1

Pcons+RBS+KpnI-4

Pcons+RBS+NheI-4

Pcons+RBS+SalI-5

Pcons+RBS+AseI-5

Pcons+RBS+XhoI-1

Pcons+RBS+SacI-1

Pcons+RBS+KpnI-1+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+XhoI-6+RBS+BFP+Ter

Digestion of

SalI Kr dig(EP)

Ligation of

NdeI dig(EP)+C backbone

9/22

Transformation of

NheI Cr

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+Ndel+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr

Digestion of

HindIII(EP)

Cultivation of

SacI-3 Kr

NcoI-7 Cr

NcoI-8 Cr

Pcons+RBS+SacI-2

Pcons+RBS+XhoI-5+RBS+BFP+Ter

pbs3C5

Ligation of

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter Cr

9/23

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 KpnI-1 Cr dig(EP)

Well 3 NdeI-1 Cr dig(EP)

Well 4 XhoI-1 Cr dig(EP)

Well 5 SacI-1 Cr dig(EP)

Well 6 AseI-1 Cr dig(EP)

Well 7 Pcons+RBS+HindIII-1 dig(EP)

Well 8 Pcons+RBS +KpnI-4 dig(EP)

Well 9 Pcons+RBS+NheI-4 dig(EP)

Well 10 Pcons+RBS+AseI-5 dig(EP)

Well 11 Pcons+RBS+XhoI-1 dig(EP)

Well 12 Pcons+RBS+SacI-1 dig(EP)

Well 13 Pcons+RBS+KpnI-7+RBS+BFP+Ter dig(EP)

Well 14 SalI Kr dig(EP) 9/21

Well 15 SalI Kr dig(EP) 9/19

DNA sequencing of

KpnI-1 Cr dig(EP)

NdeI-1 Cr dig(EP)

XhoI-1 Cr dig(EP)

SacI-1 Cr dig(EP)

AseI-1 Cr dig(EP)

Pcons+RBS+HindIII-1 dig(EP)

Pcons+RBS+KpnI-4 dig(EP)

Pcons+RBS+NheI-4 dig(EP)(fail)

Pcons+RBS+AseI-5 dig(EP)

Pcons+RBS+XhoI-1 dig(EP)

Pcons+RBS+SacI-1 dig(EP)

Pcons+RBS+KpnI-7+RBS+BFP+Ter dig(EP)

Transformation of

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter

9/24

Cultivation of

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr

NheI Cr

psb3C5 Cr

Cultivation of

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter Cr

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter Cr

NheI Cr

psb3C5 Cr

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 SalI Kr dig(EP)

Well 3 Pcons+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter Cr dig(EP)

Well 4 Pcons+RBS+SacI Cr dig(EP)

Well 5 NcoI Cr dig(EP)

Digestion of

Pcons+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter Cr dig(EP)

Pcons+RBS+SacI-2 Cr dig(EP)

NcoI-8 Cr dig(EP)

SalI-3 Kr dig(EP)

Ligation of

HindIII+psb1C3

PCR of

SacI x8

SalI x5

HindIII x2

NheI x8

Mini-prep and digestion of

Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

psb3C5

NheI

9/25

Electrophoresis and DNA sequencing of

Well 1 Marker

Well 2 NheI (fail)

Well 3 Pcons+RBS+AseI+RBS+BFP+Ter

Well 4 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 5 Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter (fail)

Transformation of

HindIII

SalI

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

PCR of

NcoI x5(9.10.11.12.13)

Pcons+RBS+SacI x5(7.8.9.10.11)

Cultivation of

NheI

Pcons+RBS+SacI-2(9/22)

Pcons+RBS+NcoI-8(9/22)

Pcons+RBS+NheI-4

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter x2

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter x2

9/26

Mini-prep and digestion(EP) of

NcoI

NheI

Pcons+RBS+SacI-2

Pcons+RBS+NheI-4

Pcons+RBS+NdeI-1+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NdeI-2+RBS+BFP+Ter

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 Pcons+RBS+NdeI-1+RBS+BFP+Ter

Well 3 Pcons+RBS+NdeI-2+RBS+BFP+Ter

Well 4 NcoI

Well 5 NheI

Well 6 Pcons+RBS+NheI-4

Well 7 Pcons+RBS+SacI-2

Cultivation of

psb3C5 x2

HindIII-3

HindIII-4

SalI-3

SalI-4

Pcons+RBS+HindIII-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+HindIII-4+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SalI-4+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI-4+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NcoI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NcoI-4+RBS+BFP+Ter


9/28

Electrophoresis of

Well 1 HindIII-3

Well 2 HindIII-4

Well 3 SalI-3

Well 4 SalI-4

Well 5 Pcons+RBS+SacI-3+RBS+BFP+Ter

Well 6 Marker

Well 7 Pcons+RBS+NcoI-3+RBS+BFP+Ter

Well 8 Pcons+RBS+NcoI-4+RBS+BFP+Ter

Well 9 Pcons+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter

Well 10 Pcons+RBS+SalI-4+RBS+BFP+Ter

Well 11 psb3C5

9/29

Electrophoresis of

Well 1 Marker

Well 2 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 3 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 4 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 5 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 6 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 7 Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter

Well 8 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 9 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 10 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 11 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 12 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 13 Pcons+RBS+NcoI+RBS+BFP+Ter

Well 14 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 15 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 16 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 17 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 18 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 19 Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter

Well 20 psb3C5 dig

Well 21 Marker

Ligation of

Pcons+RBS+KpnI + pbs3C5

Pcons+RBS+SacI + pbs3C5

Pcons+RBS+AseI + pbs3C5

Pcons+RBS+HindIII + pbs3C5

Pcons+RBS+NheI + pbs3C5

Pcons+RBS+SalI + pbs3C5

Pcons+RBS+NcoI + pbs3C5

Pcons+RBS+NdeI + pbs3C5

Pcons+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter + pbs1C3

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter + pbs1C3

Pcons+RBS+SacI + pbs1C3

Pcons+RBS+NcoI + pbs1C3

DNA sequencing of

SalI-4

HindIII-4

Pcons+RBS+SalI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SalI-2

Pcons+RBS+NheI-4

NheI(9/26)

Pcons+RBS+HindIII+RBS+BFP+Ter(9/30)

Pcons+RBS+SalI+RBS+BFP+Ter(9/30)

9/30

PCR and Electrophoresis of

Pcons+RBS+NdeI+RBS+BFP+Ter

NcoI

Pcons+RBS+NheI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+XhoI+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI+RBS+BFP+Ter

Cultivation of

Pcons+RBS+NheI-11+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NheI-13+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NdeI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+NdeI-10+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+XhoI-3+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+XhoI-5+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI-2+RBS+BFP+Ter

Pcons+RBS+SacI-11+RBS+BFP+Ter

NcoI-3

NcoI-12


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